單克隆抗體常見篩選方法為雜交瘤技術(shù)和噬菌體展示技術(shù)，但兩項(xiàng)技術(shù)均存在篩選效率低、篩選周期過長的不足，這也是限制抗體開發(fā)速度的因素之一。

如何縮短周期，提高抗體篩選效率是加速兔抗體開發(fā)的關(guān)鍵。高通量單細(xì)胞V(D)J全長測序可一次完成上萬單細(xì)胞的mRNA捕獲，單次實(shí)驗(yàn)即可獲得數(shù)萬B細(xì)胞的V(D)J全長序列，直接對接下游抗體序列合成，進(jìn)而顯著縮短抗體篩選周期及提高篩選效率。該技術(shù)也因此獲得很多抗體篩選CRO公司的青睞。

去年，墨卓生物推出針對人、小鼠的MobiCube^?高通量單細(xì)胞的V(D)J試劑盒。今年，我們傾聽客戶聲音，開發(fā)出針對兔的MobiCube高通量單細(xì)胞V(D)J試劑盒，以助力高親和力和高特異性兔抗體開發(fā)。

MobiCube^?高通量單細(xì)胞V(D)J試劑盒（兔）基于微流控技術(shù)，可同時(shí)對每個(gè)細(xì)胞完成mRNA分子的捕獲，并在此過程中給捕獲的mRNA分子打上細(xì)胞特異性分子標(biāo)簽。完成mRNA分子捕獲后，通過逆轉(zhuǎn)錄和NGS文庫構(gòu)建，即可獲得單個(gè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組信息。

與此同時(shí)，以逆轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板，可通過多重PCR或巢式PCR獲得每個(gè)細(xì)胞內(nèi)的全長VDJ序列信息。

墨卓生物高通量單細(xì)胞V(D)J（兔）測序平臺，可結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)/免疫磁珠分選等方法，先從兔PBMC或者脾臟等樣本中分選得到B細(xì)胞，再用墨卓的高通量單細(xì)胞V(D)J測序平臺，完成單B細(xì)胞的VDJ測序，一周內(nèi)即可快速獲得候選抗體序列。

當(dāng)然作為高通量單細(xì)胞平臺，您也可以獲得單細(xì)胞懸液后，直接進(jìn)行高通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建及測序。因?yàn)橥ㄟ^轉(zhuǎn)錄組信息，我們也可以幫您高效鑒定樣本中的B細(xì)胞，同時(shí)給出對應(yīng)的VDJ序列信息。

模擬真實(shí)場景的數(shù)據(jù)表現(xiàn)

為了模擬流式細(xì)胞術(shù)/免疫磁珠分選后得到細(xì)胞數(shù)較少的真實(shí)場景，我們將投入細(xì)胞量調(diào)整至8000個(gè)，進(jìn)行本次測試，對于客戶關(guān)心的B細(xì)胞也重點(diǎn)進(jìn)行了測試。

在此情況下，通過5端轉(zhuǎn)錄組測序識別到4,002個(gè)細(xì)胞，中值基因數(shù)在1,375。

細(xì)胞注釋圖

在此樣本中捕獲B細(xì)胞2,710個(gè)，其中重輕鏈成功配對率達(dá)到85.6%。這些細(xì)胞我們都可以拿到全長的V(D)J序列信息，構(gòu)建抗體表達(dá)載體，用于生產(chǎn)抗體。

BCR映射圖

令人安心的穩(wěn)定性

我們同樣在投入低細(xì)胞的情況下，進(jìn)行了穩(wěn)定性測試。將一份PBMC樣本一分為二，在兩臺MobiNova^?-100儀器上進(jìn)行測試。結(jié)果顯示，兩組實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞分群圖高度重疊，在投入5000個(gè)細(xì)胞的情況下，捕獲細(xì)胞數(shù)為2301，2501，中值基因數(shù)分別為1006，1008。從細(xì)胞分群、捕獲細(xì)胞數(shù)、中值基因數(shù)上均表現(xiàn)出高重復(fù)性。

2次獨(dú)立測試，兔PBMC樣本5端轉(zhuǎn)錄組圖譜高度重復(fù)

獨(dú)立測試1                                           獨(dú)立測試2

VDJ數(shù)據(jù)分析結(jié)果也顯示，兩組測試的BCR富集效果高度可重復(fù)，同時(shí)， BCR的重輕鏈配對率均達(dá)到80%以上。

正式開啟，掃碼下方二維碼，填寫報(bào)名信息，既有機(jī)會獲得2個(gè)樣本的免費(fèi)DEMO名額。

本次DEMO僅限r(nóng)abbit（優(yōu)先接受新西蘭兔樣本）來源樣本，活動最終解釋權(quán)歸墨卓生物所有。