文章中使用的單細(xì)胞建庫平臺為墨卓生物的MobiNova?-100，分析軟件為MobiVision?，利用該平臺開展的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，揭示了BHD可能通過Cav1調(diào)控外泌體MALAT1/YAP1/HIF-1α軸來促進腦缺血后的血管生成和神經(jīng)功能恢復(fù)。

BHD對腦缺血后神經(jīng)行為評分和病理損傷的改善

實驗采用了中腦動脈閉塞（MCAO）技術(shù)來建立小鼠的腦缺血模型，以此來模擬人類腦卒中的病理狀態(tài)。小鼠被隨機分配到不同的實驗組以接受不同劑量BHD治療，治療開始于手術(shù)后6小時，持續(xù)7天。通過神經(jīng)行為評分和組織病理學(xué)評估，包括HE染色和Nissl染色，BHD顯示出對腦缺血后小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的促進作用。這些結(jié)果表明BHD能夠減輕腦缺血引起的神經(jīng)功能缺損和腦組織損傷。

BHD促進腦缺血后小鼠的血管生成

研究人員用免疫熒光染色技術(shù)檢測了小鼠腦缺血側(cè)皮層的微血管密度（MVD），進而用以衡量血管生成。實驗結(jié)果顯示，與模型組（未經(jīng)BHD治療的腦缺血小鼠）相比，BHD治療組的小鼠在缺血側(cè)皮層區(qū)域的MVD有顯著增加。研究者還使用了CD31/Ki67免疫熒光雙染技術(shù)來評估血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖情況。雙標(biāo)陽性細(xì)胞的數(shù)量增加表明BHD不僅促進了新血管的形成，還增加了血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖活性。這些證據(jù)表明BHD能夠促進新血管的形成，從而改善腦缺血區(qū)域的血液供應(yīng)。

單細(xì)胞測序分析BHD對MCAO小鼠腦組織細(xì)胞組成的影響

MCAO模型小鼠進行了BHD治療后，收集其缺血側(cè)皮層區(qū)域的腦組織樣本進行單細(xì)胞測序分析。與對照組相比，BHD治療顯著改變了缺血側(cè)皮層區(qū)域的細(xì)胞組成，某些細(xì)胞類型的豐度發(fā)生了變化，例如缺血區(qū)域的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量在BHD的作用下有所增加，這與BHD促進血管生成的觀察結(jié)果一致。表明BHD可能通過調(diào)節(jié)特定細(xì)胞類型的基因表達(dá)來發(fā)揮作用。

單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)還揭示了BHD對特定細(xì)胞類型中差異表達(dá)基因（DEGs）的影響。通過比較MCAO模型組與BHD治療組之間的基因表達(dá)差異，研究人員識別了與血管生成、細(xì)胞增殖、遷移和神經(jīng)保護等相關(guān)的基因。

富集分析探討了BHD影響的生物學(xué)途徑和功能。KEGG通路分析揭示了BHD影響的特定信號通路，GO富集分析揭示了BHD調(diào)節(jié)的細(xì)胞過程和分子功能。這些分析結(jié)果有助于理解BHD如何在分子層面上促進腦缺血后的恢復(fù)。

BHD通過Cav1調(diào)節(jié)外泌體MALAT1/YAP1/HIF-1α軸影響血管生成

之前有研究表明，caveolin-1（Cav1）細(xì)胞間信號傳遞中起重要作用，所以本研究特意觀察了該基因在不同細(xì)胞類群之間的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Cav1明顯集中表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞。

本研究借助單細(xì)胞測序技術(shù)進行了BHD在腦缺血后促進血管生成和神經(jīng)功能恢復(fù)作用的全面理解，揭示了BHD通過Cav1調(diào)節(jié)外泌體MALAT1/YAP1/HIF-1α軸的潛在分子機制。這一機制可能為腦缺血后血管生成和神經(jīng)功能恢復(fù)提供了新的治療策略。這些發(fā)現(xiàn)不僅增進了我們對BHD作用方式的理解，也為未來的藥物開發(fā)和臨床治療提供了重要的分子靶點。